科研人员构建了可表达 WRK10-MYC融合蛋白的重组农杆菌 Ti质粒并成功转化植物细胞得到转基因植株,该质粒的部分结构如图1 所示,其中 Kan 为卡那霉素抗性基因,Hyg 为潮霉素抗性基因,MYC标签序列编码标签短肽 MYC,WRK10 蛋白为转录因子,可与图2 中 PIF4 基因启动子某区段结合并激活该基因的转录。
(1)位于 Ti 质粒不同位置的卡那霉素抗性基因和潮霉素抗性基因的作用分别是________。图中启动子的方向与对应基因转录的方向一致,从编码链的角度分析 P1 和 P2方向不同的原因是________。
(2)已知利用LP 和 RP扩增结果为大带,BP 和 RP扩增结果为小带。可用图中三引物进行两次PCR 的方法鉴定转基因植物后代中的纯合转基因植株。T-DNA 插入植物染色体DNA分子后会抑制原插人位点两侧引物的扩增产物的出现,则纯合转基因植株 PCR 检测结果为________(填“大带”或“大带和小带”或“小带”)。
(3)为了探究 WRK10蛋白与 PIF4 基因启动子结合的具体区段(如图2 所示),科研工作者利用短肽 MYC抗体处理了对应的基因表达产物,后经一系列过程,得到图 3 所示的结果,由此推测转基因植株体内 WRK10 蛋白在_________条件下能够结合 PIF4 基因启动子的________区段从而激活该基因的表达。MYC 标签序列编码的标签短 肽 MYC 的作用是________。
答案:
(1)卡那霉素抗性基因可用于筛选成功转化的农杆菌(答用于筛选重组农杆菌/成功导入了质粒的农杆菌)﹔潮霉素抗性基因可用于筛选成功转化的植物细胞(或筛选转基因植物细胞/成功导入了目的基因的植物细胞也可)潮霉素抗性基因的编码链是b链(或Hyg 基因所对应的编码链是b链),WRK10基因的编码链是a链
(2)小带
(3)红光W12与MYC抗体结合,便于对WRK10蛋白表达的检测、示踪(与MYC抗体结合得,检测WRK10蛋白是否表达或者检测有无WRK10蛋白意思对即可得)