CRISPR-Cas12a系统是第二类用于编辑哺乳动物基因组的CRISPR-Cas系统，该系统主要包含crRNA和Cas12a蛋白两部分，crRNA能特异性识别并结合特定的DNA序列，从而引导Cas12a蛋白到相应位置剪切DNA。某科研团队基于CRISPR-Cas12a系统对宫颈癌细胞中的KIFC1基因进行敲除，来探讨KIFC1基因在宫颈癌细胞中的功能及对宫颈癌HeLa细胞增殖的影响。
（1）在CRISPR-Cas12a系统中，crRNA的序列与目的基因特定碱基序列部分结合，结合区域最多含_________种核苷酸；细菌细胞中的__________________也能起到类似Cas12a蛋白的作用。若要将KIFC1基因从目标DNA上剪切下来，需要设计_________种crRNA。
（2）为保证目的基因与PX458质粒正确连接，在扩增目的基因时，应在引物端加入相应的限制酶序列，其中P1的碱基序列为5′_________3′（写出前9个碱基）。采用PCR技术对一个DNA进行扩增时，第n次循环共需要引物_________个。
（3）在目的基因与PX458质粒连接时，可用_________（填“E.coliDNA连接酶”或“T4DNA连接酶”）进行连接。
（4）将crRNA-Cas12a重组载体成功转染至HeLa细胞，与对照组相比，实验组中KIFC1蛋白表达量如图2所示，细胞数目的变化如图3所示，由此可得出的结论是_________，判断依据是_________。
答案：
8,限制酶（限制性内切核酸酶）,2,CAGCTGCTC,2n,T4DNA连接酶,KIFC1基因可以促进HeLa细胞的增殖,敲除细胞株中KIFC1蛋白表达量明显下降，证明HeLa细胞KIFC1基因敲除成功：KIFCl敲除组细胞数目显著低于对照组，表明KIFC1敲除可使HeLa细胞增殖能力下降