选修3-生物技术与工程-基因工程-PCR扩增质粒

PCR扩增几次得到目标等长产物

一、PCR扩增链DNA

1、引物与两端对齐，1次

2、引物与一端对齐，2次

3、引物与两端不齐，3次

二、PCR扩增环DNA(向两头扩增)，并变成链

1、引物尾部对齐，2次

2、引物尾部留空，3次

详细说明，

第一次，得到DNA含：环形（模板）和单链

第二次，得到DNA含：单链（模板）和短链

第三次，得到DNA含：两个等长短链(目标链)

如果已知一-小段DNA的序列，可采用PCR的方法,简捷地分析出已知序列两侧的序列,具体流程如图(以EcoRI酶切为例)，依据右图回答下列问题

（1）为获得环状的DNA，可以用不同的限制酶切割，但需要满足的条件是？

 产生相同的末端(黏性末端或平末端均可)

（2）获得图中的PCR产物，需要扩增几次？3次(解释见上面)

（3）PCR产物的序列与片段F的完整序列是否相同？

 否。缺少已知序列中两个引物尾部之间序列。

（4）下图所列为已知的DNA序列

下列序列符合PCR产物的是      C     ，序列符合片段F的完整序列的是   B     。

A． 5′- AACTATGCG------AGCCCTT-3′    B． 5′- AATTCCATG-------CTGAATT-3′

C． 5′- GCAATGCGT------CTCATGA-3′    D． 5′- TTGATACGO-------CGAGTAC-3′