选择性必修2，P20拓展应用2改编：
某研究小组从土壤中分离获得能分解纤维素的细菌（A 菌），从 A 菌中提取一种纤维素酶基因（CBHⅡ，长度为1.4kbp）并进行 PCR扩增，然后与高效表达载体 pUT质粒（长度约为 11.7kbp）连接构建成重组质粒并导入 A 菌，从而获得分解纤维素能力更强的工程菌（B菌）。
（1）采集土样时，可以选择树林中多年落叶形成的腐殖土，原因是 ____ 。采集到的样品加无菌水稀释后 __ （填需要或不需要）进行灭菌处理。
（2）CBHⅡ基因两端需添加相关酶切位点才能与图1 所示的 pUT质粒连接，因此扩增CBHⅡ基因时需在两种引物上分别添加 __ 序列和 _____ 序列。
限制酶 | 识别序列及酶切位点 |
Bgl II | A↓GATCT |
BstE II | G↓GTAACC |
Sac I | G↓AGCTC |
Msp I | C↓CGG |
BamH I | G↓GATCC |
（3）为了鉴定重组质粒是否构建成功，将重组质粒导入 A 菌，并将其接种在含 _____ 的培养基中培养，然后提取 3 个不同菌落的质粒分别进行双酶切验证，将酶切片段和CBHⅡ基因分别进行电泳，结果如图 2 所示。据此分析，菌落 ______ 中成功导入了重组质粒。
（4）为检测 B菌的纤维素分解能力，将含有 20%的纤维素的培养基分为三组，一组接种B 菌，一组不做处理，一组接种 _____ ，在相同条件下培养一段时间，测培养基中纤维素含量，结果如图 3 所示，说明 _____ 。
答案解析
腐殖土中富含纤维素 不需要 AGATCT GGTAACC
抗生素N
2、3 A菌 B菌分解纤维素的能力最强
解析
【解析】
【分析】
1、基因表达载体的构建：是基因工程的核心步骤，基因表达载体包括目的基因、启动子、终止子和标记基因等。
2、实验设计应遵循对照原则、单一变量原则和无关变量相同且适宜原则。
【详解】
（1）在自然条件下筛选目的菌，应在富含该菌种的环境中寻找，因腐殖土中富含纤维素，故欲从土壤中分离获得能分解纤维素的细菌，应选择树林中多年落叶形成的腐殖土；为避免目的菌被杀死，采集到的样品加无菌水稀释后不需要进行灭菌处理。
（2）为保证目的基因能正常表达，目的基因应插入到启动子和终止子之间，且应至少保留一个标记基因，故应选择Bgl II和BstE II进行酶切，故扩增CBHⅡ基因时需在两种引物上分别添加AGATCT序列和GGTAACC序列。
（3）由于用Bgl II和BstE II进行酶切后，抗生素M抗性基因被破坏，故为了鉴定重组质粒是否构建成功，将重组质粒导入 A 菌，并将其接种在含抗生物N培养基中培养；据图可知，用Bgl II和BstE II进行酶切后，该环状DNA应得到两个长度的片段，而图2中的2和3酶切片段有两个，符合题意，故据此推测，菌落2和3中成功导入了重组质粒。
（4）本实验目的为检测 B菌的纤维素分解能力，则实验的自变量为菌种类型，因变量为纤维素的分解能力，可用纤维素的剩余量进行比较说明，实验设计应遵循对照与单一变量原则，故将含有 20%的纤维素的培养基分为三组（无关变量一致），一组接种B 菌，一组不做处理，一组接种A菌；据图3可知，对照组1的纤维素含量最高，B菌的纤维素含量最低，说明B菌分解纤维素的能力最强。
【点睛】
本题结合图解，考查基因工程、微生物的分离和培养，要求考生识记基因工程的原理和操作工具，掌握各操作工具的作用；识记微生物的分离和应用，能结合所学的知识准确答题。