不定项。农杆菌Ti质粒上的T-DNA可以转移并随机插入到被侵染植物的染色体DNA中。研究者将下图中被侵染植物的DNA片段连接成环，并以此环为模板，利用PCR技术扩增出T-DNA插入位置两侧的未知序列，以此可确定T-DNA插入的具体位置。下列说法正确的是（ ）
![BK4DI]K1BPK1(81}VYOHN$W.png](/usr/uploads/2022/04/23/1650698151461356.png "1650698151461356.png")
A．进行PCR扩增的依据是DNA分子双链复制的原理
B．进行PCR扩增需要的酶有解旋酶和热稳定DNA聚合酶
C．利用图中的引物②、③组合可扩增出两侧的未知序列
D．通过与受体细胞的基因组序列比对，可确定T-DNA的插入位置
答案：AD
【解析】本题”坑“在于扩增未知序列。
【分析】
PCR技术：
1、概念：PCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术。
2、原理：DNA复制。
3、前提条件：要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一对引物。
4、条件：模板DNA、四种脱氧核苷酸、一对引物、热稳定DNA聚合酶（Taq酶）。
5、过程：①高温变性：DNA解旋过程（PCR扩增中双链DNA解开不需要解旋酶，高温条件下氢键可自动解开）；低温复性：引物结合到互补链DNA上；③中温延伸：合成子链。
【详解】
A、PCR扩增依据的是DNA分子双链复制的原理，A正确；
B、进行PCR扩增需要热稳定DNA聚合酶（TaqDNA聚合酶），但不需要解旋酶，B错误；
C、DNA的两条链反向平行，子链从引物的3′端开始延伸，则利用图中的引物①、④组合可扩增出两侧的未知序列，C错误；
D、通过与受体细胞的基因组序列比对，即可确定T-DNA的插入位置，D正确。
故选AD。