In-Fusion技术是一项新型的无缝克隆技术。该技质粒末端术关键是要在目的基因两端构建与线性化相同的DNA序列(即同源序列,通常为15～20bp),然后用In-Fusion 酶处理即可实现无缝连接。它的操作步骤大致为:①质粒线性化;②PCR扩增出两目的基因端含线性化质粒同源序列的目的基因;③用下形成与线性化质粒同源区域在In-Fusion 酶作重组质粒:④将重组质粒导入受体细胞。回答下列问题。
(1)过程①中需要用到的酶是_________。另外，利用_______处理也可以直接得到线性化质粒。
(2)据图分析,为保证扩增出所需的目的基因,引物序列进行A或引物B要依据______序列设计。过程②经过_____轮循环即可初步得到符合要求的目的基因片段。
(3)过程③中,同源序列1、2中的碱基排序不同,这样设计的好处是______________。图示In-Fusion技术可作为模型使用,一般来说只需要改变图中的________,即可快速构建出另一种目的基因的重组质粒。
(4)若目的基因是氨苄青霉素抗性基因,以大肠杆菌作为受体细胞时，过程④需要用______处理大肠杆菌。
答案:
(1)耐高温的DNA聚合酶 限制酶
(2)目的基因和质粒 3
(3)防止目的基因反向连接; 防止线性化质粒或目的基因的自身环化 引物A和引物B
(4)Ca2+